生物發(fā)光技術
                                                       上海連橋生物科技有限公司
                      原理

生物發(fā)光是生物體內一種特定酶催化，將生物化學能轉化為光能的化學發(fā)光現(xiàn)象。生物發(fā)光技術通過將熒光酶基因整合到預期觀察的細胞染色體DNA中以表達熒光素酶，然后培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株。將標記好的細胞接種到實驗動物體內后，當外源（腹腔或靜脈注射）給予其第五熒光素（luciferin），在生物體內環(huán)境中三磷酸腺苷（ATP）、O2及Mg2+存在的條件下，熒光素酶催化底物熒光素發(fā)生氧化脫羧反應，釋放可見光能，從而實現(xiàn)生物發(fā)光（偏紅色），通過電荷耦合器件（CCD）設備等生物光學成像系統(tǒng)進行檢測，即生物發(fā)光活體成像技術（BLI）。基因、細胞和活體動物都可被熒光素酶基因標記。熒光素酶在標記細胞內的表達可以直接指示細胞在體內的活動和反應，其中ATP提供生化反應所需的能量，即該反應必須在活細胞內才會存在和產生發(fā)光現(xiàn)象，且發(fā)光強度與標記細胞的數(shù)目線性相關

這種無需激發(fā)就可發(fā)出的生物熒光，組織穿透能力強，靈敏度高，由于沒有激發(fā)光的非特應性干擾，信躁比較高。

應用

生物發(fā)光技術因具有*的靈敏度，便于對疾病動物模型微小病灶進行檢測，而且不涉及反射性有害物質，安全系數(shù)高，實驗結果直觀，可精確定量，重現(xiàn)性好，操作簡單，得到迅速發(fā)展。目前該技術已應用于醫(yī)療衛(wèi)生、食品、環(huán)境等領域，尤其在抗腫瘤領域應用極為廣泛，實現(xiàn)了在活體內實時、連續(xù)地對腫瘤細胞生長、浸潤、轉移等惡性生物學行為的檢測，也可進行藥物選擇及個體化治療。

由于熒光素酶的活性和穩(wěn)定性受很多因素影響，如緩沖液種類、溫度、PH、金屬離子、酶濃度及發(fā)光測定時間等，尤其PH對其影響對大，在使用中需要加以注意。

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